IBDV B87株及BC6/85株感染SPF鸡后病毒在机体内的动态分布研究
The Study on Dynamic Distribution of Spf Chickens Infected with IBDV B87 Strain and BC6/85 Strain
传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的一种急性、高度接触性传染病,主要损伤3~6周龄雏鸡的中枢免疫器官法氏囊.IBD自被发现报道以来,已在全世界范围内广为流行,其作为一种严重危害养禽业发展的传染病而备受关注.目前预防和控制IBD的主要措施是进行疫苗免疫,而研究病毒在鸡体内的分布情况与增殖规律是阐明病毒致病机理和免疫机理的重要基础,因此需建立一种准确可靠的方法研究IBDV强毒和弱毒在感染鸡体内的动态分布情况,以探究IBDV不同毒株的致病情况,同时为进一步合理、有效利用疫苗预防IBD提供依据.本研究首先根据弱毒B87 E6和强毒BC6/85的基因差异区分别设计合成弱毒B87 E6的探针P1、强毒BC6/85的探针P2,参照文献合成的IBDV的TaqMan-MGB通用探针PN.继而优化荧光定量RT-PCR的反应条件,进行特异性、灵敏度的检测以及标准曲线的建立.结果显示,探针P1和P2灵敏度结果分别为:B87毒的探针P1可检测5个ELD50/0.2mL;BC6/85毒株的探针P2可检测1.6个ELD50/0.2mL;根据灵敏度检测判定探针P1的Ct值在13~33之间的样品为阳性;探针P2的Ct值判定在14~32之间的样品为阳性.探针PN所建立的标准曲线方程相关系数为0.996,反应扩增效率为1.0,最低基因拷贝检测量为4.22*102copies/μL;表明本实验建立的荧光定量RT-PCR方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,符合进一步的实验要求.其次,本研究利用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR方法,对B87株和BC6/85株分别和混合感染3周龄SPF鸡后病毒在机体组织内的动态分布进行了研究.三个实验组的研究结果表明,B87株和BC6/85株分别或混合经口感染3周龄SPF鸡后,所有组织中均能检测到病毒基因,其病毒在机体内是全身分布的.但不同时间点在法氏囊、脾脏、肝脏、肾脏、腿部肌肉与血液组织样品中的基因拷贝数存在明显差异,而不同组在同一时间点的相同组织中的病毒基因拷贝数是基本相似的,其中血液中的病毒基因拷贝数最低,而法氏囊中的基因拷贝数最高.第三,本研究利用建立的B87株和BC6/85株鉴别荧光定量RT-PCR检测方法,对B87株和BC6/85株分别或混合感染3周龄SPF鸡后,病毒在机体组织内的动态分布进行了研究.研究结果证实,强毒BC6/85感染SPF鸡后,病毒在组织中的分布更广,且病毒含量更高,而B87弱毒除在法氏囊中的病毒含量与强毒相似外,其它组织中均明显低于强毒;而强毒弱毒混合感染后,强毒明显干扰弱毒在鸡体内的复制和组织分布;而弱毒感染后一定时间后,虽然不能完全阻止强毒在鸡体组织中的复制,但可以明显影响强毒在不同组织中的动态分布规律.本研究结果为IBDV的致病机理研究以及其防控措施的制定提供了一定的理论基础.
- 作者：
- 郑丽
- 学位授予单位：
- 中国兽医药品监察所
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2017年
- 导师姓名：
- 蒋桃珍
- 中图分类号：
- S858.31
- 关键词：
- IBDV；荧光定量RT-PCR；Ct值；动态分布
- IBDV; Fluorescence quantitative RT – PCR; Ct value; Dynamic distribution;